NK细胞体外扩增试剂盒的操作指南是怎样的？

更新时间：2025-11-08

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　　NK细胞（自然杀伤细胞）作为机体重要的免疫细胞，具有无需预先致敏即可直接杀伤病毒感染细胞和肿瘤细胞的能力。NK细胞体外扩增试剂盒对免疫治疗研究和应用具有重要价值。本指南简要介绍适用于NK细胞扩增的标准化操作流程。

　　一、实验前准备

　　耗材准备：提前灭菌处理培养瓶、移液管等耗材，确保无热原及化学残留。

　　试剂解冻：在冰箱缓慢解冻专用培养试剂，轻柔混匀后置于冰上备用。

　　样本处理：采集外周血或单个核细胞，使用密度梯度离心法分离单个核细胞层，PBS缓冲液洗涤细胞，去除残留杂质。

　　二、培养体系建立

　　接种细胞：将处理后的PBMC按适宜密度接种于培养瓶中，加入基础培养基激活细胞。

　　激活扩增：加入预配置的激活试剂，轻柔混匀后置于培养箱中培养。

　　环境控制：每日观察细胞生长状态，维持培养箱稳定参数，避免频繁移动。

　　三、扩增过程维护

　　补液换液：按既定周期补充无血清培养基，维持细胞密度与营养供给。

　　分瓶操作：当细胞密度达到扩增上限的时候，使用温和混匀手法将细胞转移至新培养瓶，继续扩增。

　　异常监测：若发现细胞聚团、形态异常，立即停止操作并更换耗材或培养基。

　　四、扩增终止与收获

　　细胞成熟判定：通过显微镜观察细胞形态评估扩增效果。

　　温和分离：扩增完成后，收集细胞悬液，低速离心去除残留培养基。

　　细胞保存：收获细胞可短期保存于立即用于功能实验，长期存储需按冻存流程处理。

　　五、注意事项

　　全程遵循无菌操作原则，避免交叉污染。

　　试剂开封后需当日用尽，避免反复开盖影响活性。

　　操作人员需接受基础细胞培养培训，熟悉细胞形态及异常识别。

　　NK细胞体外扩增试剂盒通过优化试剂配比与操作流程，实现高活性NK细胞的安全高效扩增。实验过程中需结合实际情况灵活调整，确保细胞质量满足研究或应用需求。